Анализы крови молекулярные

Анализы крови молекулярные

Являются на сегодняшний день единственной возможностью выявить предрасположенность к болезням задолго до их появления. С точки зрения генетики все болезни можно разделить на три вида:

Наследственные заболевания — вызваны различными генными дефектами, к таким заболеваниям относятся: синдром Дауна, гемофилия, дальтонизм и другие.

Ненаследственные заболевания — это различные инфекционные заболевания, травмы, ожоги. Генетические факторы в этом случае могут повлиять только на уже развившееся заболевание.

Заболевания с наследственной предрасположенностью (мультифакторные заболевания) — объединяют в своем происхождении несколько факторов: влияние окружающей среды и наследственность. К таким заболеваниям относятся диабет, остеопороз, гипертония, бронхиальная астма, псориаз, эндометриоз, шизофрения, рак молочной железы и прочие онкологические заболевания.

Информация о большинстве известных заболеваний «записана» в генах человека. Считав эту информацию с помощью генетического анализа, стало возможным предупредить развитие таких заболеваний как сахарный диабет, онкологические заболевания и многие другие, зная предрасположенность к данным заболеваниям.

Лицам с отягощенной наследственностью по онкологическим, сердечно-сосудистым, психическим, эндокринным заболеваниям, желающим знать насколько велик для них риск этих заболеваний.

Людям, подвергающимся неблагоприятным факторам окружающей среды (стрессы, профессиональные риски, неправильное питание).

Женщинам и мужчинам, страдающим бесплодием.

I. Моногенные генетические заболевания (синдром Жильбера, лактазная недостаточность).

II. Определение генетически опосредованного риска развития онкологических заболеваний:

  1. Определение генетически опосредованного риска развития рака молочной железы и яичников.
  2. Определение генетически опосредованного риска развития рака толстой кишки:
    • наследственный неполипозный рак толстой кишки;
    • десмоидные опухоли: семейный аденоматозный полипоз, полипозный рак толстой кишки.
  3. Определение генетически опосредованного риска развития рака щитовидной железы:
    • синдром множественной эндокринной неоплазии второго типа;
    • медуллярный рак щитовидной железы.
  4. Определение генетически опосредованного риска развития рака желудка.
  5. Генетически опосредованный риск развития рака тела матки.
  6. Определение генетически опосредованного риска развития рака предстательной железы.
  7. ДНК-диагностика ранних стадий и предпосылок развития рака толстой кишки.
  8. Определение предпосылок для эффективного терапевтического лечения немелко-клеточного рака легкого гефатинибом.
  9. Идентификация рекомбинации генов ABL/BCR при лейкозах (Филадельфийская хромосома).

III. Определение генетически опосредованного риска развития мультифакторных заболеваний.

  1. Определение генетически опосредованного риска развития гипертонической болезни.
  2. Определение генетически опосредованного нарушения липидного обмена (эндотелиальная дисфункция).
  3. Определение генетически опосредованного риска развития остеопороза (профилактика остеопороза).
  4. Определение генетически опосредованного риска возникновения тромбофилических состояний.
  5. Определение генетически опосредованного риска возникновения ревматоидного артрита.
  6. Оценка метаболизма и эффективности действия лекарственных препаратов.
  7. Определение генетически опосредованного риска развития преэклампсии.
  8. Определение генетически опосредованного риска развития сахарного диабета 1 типа.
  9. Определение генетически опосредованного риска развития сахарного диабета 2 типа.
  10. Определение генетических причин нарушений репродуктивных функций.

В норме результат отрицательный.

Цель проведения молекулярно-генетических методов исследования – определение наличия модификаций и изме­нений в некоторых хромосомах, ДНК-участках или генах. Широкое использование на практике этот способ работы с ДНК получил в 70-80 гг. прошлого столетия.

Оглавление: Когда назначают молекулярно-генетические исследования Кому назначают молекулярно-генетические исследования Как проводится молекулярно-генетический тест

Молекулярно-генетические исследования помогают диагностировать:

  1. Моногенные генетические заболевания;
  2. Вероятность развития онкологических болезней;
  3. Наличие факторов, провоцирующих мультифакторные болезни.

Определение риска развития онко-процессов при помощи молекулярно-генетического исследования выявляет:

  • Риск развития рака желудка и щитовидной железы;
  • Вероятность возникновения рака толстой кишки и ранних стадий этого заболевания;
  • Генетическую предрасположенность к развитию рака тела матки, яичников, молочной и предстательной железы;
  • Наличие рекомбинации генов ABL/BCR, выявляемых при лейкозах;
  • Наличие предпосылок, обеспечивающих эффективность противоопухолевой терапии гефатинибом при наличии немелко-клеточного рака .

Проводя молекулярно-генетические тесты на наличие генетически обусловленных предпосылок развития мультифакторных заболеваний, удается выявить риск развития:

С помощью этого метода оценивают метаболизм и оправданность применения тех или иных лекарственных препаратов.

Молекулярно-генетические тесты показаны лицам:

  • страдающим бесплодием;
  • подвергающимся воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды;
  • имеющим в роду близких родственников, страдающих онкологическими, психическими, сосудистыми и эндокринными заболеваниями.

Первый этап молекулярно-генетического анализа очень важный и заключается в получе­нии РНК и ДНК образцов, которые являют собой отдельные фраг­менты ДНК клетки или всю её цепочку. Для выделения необходимого количества фрагментов используют способ амплифицирования, то есть их размножения путем полимеразной цепной ре­акции (фермента­тивная репликация).

Для анализа молекул ДНК требуется их предварительное деление на части и обработка бактериальными эндонуклеазами (рестриктазами) – ферментами, которые могут разрезать двойную спираль ДНК на части по 4-6 пар.

Фрагменты ДНК разделяют по длине и размеру при помощи специального геля (полиакриламидного и агарозного), применяя электрофорез. Под действием последнего они перемещаются вниз по гелю с разной скоростью, оставляя за собой дискретную полосу.

Молекулярно-генетические исследования наследственных патологий также ис­пользуют с целью изучения человеческого генома. Блот-гибридизация по Саузерну позволяет в данном случае определить необходимые для этого особые фрагменты ДНК. При этом вначале прибегают к денатурации ДНК, в результате чего получают фрагмен­ты в виде одной цепочки и их переносят на фильтр (нейлоновый или нитроцеллюлозный), который замочен в буферном растворе.

Гель, на котором находятся ДНК-фрагменты, переносят на фильтровальную бумагу с солевым раствором (с высоким %концентрации). Сверху на­кладывается по очереди нитроцеллюлозный фильтр и фильтровальная, но сухая бумага (для впитывания солевого раствора). В итоге одноцепочечные ДНК остаются на фильтре в таком же положении как на геле.

Для выявления необходимых фрагментов проводят процедуру гибридизации ДНК с клониро­ванным его фрагментом или радиактивным ДНК-зондом. Полученный результат этой процедуры обнару­живается посредством радиоавтографии, благодаря которой все комплементарные зонды после­довательности ДНК отражаются в ви­де радиоактивной полосы.

Метод Саузерна позволяет воссоздать рестрикционную карту гено­ма человека в определённой части гена. Это дает возможность обнаружить наличие любых дефектов в самом гене. Разработанные методы считаются довольно эффективными и позволяют проводить сверхточную диагностику наследственных заболеваний. С этой целью из эмб­риональных клеток, которые содержатся в амниотической жидкости, выде­ляют ДНК. В последующем ее гибридизируют, применяя Саузерн-блоттинг с радиоактив­ным ДНК-зондом. В итоге очень легко распознать аномальный эмб­рион, потому что его ДНК гибридизируется исключительно с ДНК-зондом, который является комплементарным мутантной последовательности.

Современная наука использует ряд методов для выявления мутаций. Все они делятся на косвенные и прямые молекулярно-генетические способы исследований.

Косвенные способы выявления мутаций используются в случае, если известно по­ложение гена на генетической карте, но не расшифрована его нуклеотидная последовательность.

Прямая диагностика бывает в нескольких видах:

  1. Секвенирование. Это техника выявления нуклеотидной по­следовательности для определения замены оснований в определенном фрагменте.
  2. Блот-гибридизация но Саузерну. Это рестриктный анализ, с помощью которого находят мутации, имеющие нарушения места рес­трикции.
  3. Аллелоспецифическая гибридизация с синтетическим зондом. Данный способ также позволяет выявить в геномной ДНК мутации.
  4. Электрофорез двухцепочечной ДНК в геле (равномерно денатурирующем, нейтральном). Оно являет собой расщепление ДНК на химическом и ферментативном уровне. В тех местах, где непра­вильно сшиты основания обычно определяют группу мутаций.
  5. Изучение электрофоретической подвижности ДНК-мутантных молекул.
  6. Анализ синтезируемого белка с помощью электрофореза. О наличии мутаций судят по изме­нению подвижности белка в системе in vitro.

Также мутации диагностируют с помощью определения полиморфных фрагментов (рестрикционных по длине) в геноме. Для этого применяют ту же технику блот-гибридизации по Саузерну.

Среди прочих типов полиморфизма ДНК также выделяют микросателлиты. Они являют собой корот­кие после­довательности ДНК (тандемно повторяющиеся моно-, ди-, три- и тетрануклеотидные). Они служат маркерами дефектных мутаций или маркерными локусами аллельных вариантов гена в исследовании.

Ген, который ответственный за развитие хореи Гентингтона, тя­желой патологии, был открыт в 1993 г. При этой болезни наблюдается снижение интеллектуального развития, расстройство движений ЦНС у людей после 40 лет. Болезнь является наследственной и передается по аутосомно-доминантному типу, имеет 100 % пенетрантность. Расположен ген болезни в 4-й хромосоме, в корот­ком плече.

Этот ген включает в себя нуклеотидную последовательность в виде много­кратного повторения нуклеотида ЦАГ. У здоровых людей таких повторов в норме 11-34, больные хореей имеют 37-86, но обычно 45. Из этого следует вывод, что хорея Гентингтона – это наследственная патология с мутацией ге­на в многократном увеличении числа его копий (экспансия).

Викторова Юлия, акушер-гинеколог

2,649 просмотров всего, 1 просмотров сегодня

(116 голос., средний: 4,65 из 5) Загрузка.

Для прочтения нужно: 3 мин.

Расшифровка генома человека стала настоящим прорывом ХХ века: мир узнал о том, как заложенный «код» влияет на каждого из нас. И пусть ученые до сих пор ведут споры вокруг этой темы, мы уже можем оценить результаты многолетних исследований: любому человеку стала доступна молекулярно-генетическая диагностика.

Как узнать свой личный «код» и для чего это нужно? Об этом мы расскажем в данной статье.

Итак, молекулярно-генетическая диагностика — сравнительно новый метод обследования организма, позволяющий точно и быстро выявить вирусы и инфекции, мутации генов, вызывающих патологию, оценить риски наследственных и иных заболеваний. И это далеко не полный спектр возможностей исследования ДНК.

Важнейшим достоинством молекулярно-генетической диагностики является минимальная степень медицинского вмешательства, поскольку исследование проводят in vitro. Метод успешно применяют даже для диагностики заболеваний у эмбрионов, а также у ослабленных и тяжелобольных пациентов. Самый распространенный материал для исследования — кровь из вены, однако возможно выделение ДНК/РНК из других жидкостей и тканей: слюны, соскоба слизистой рта, выделений из половых органов, околоплодной жидкости, волос, ногтей и т.д.

Молекулярная диагностика — значительный шаг к персонализированной медицине, она позволяет учитывать все особенности конкретного пациента при обследовании и терапии.

Итак, исследование ДНК/РНК используется во многих разделах медицины. Давайте рассмотрим задачи и области, в которых активно применяют молекулярную диагностику:

  • Выявление существующих патологий. Например, к молекулярной диагностике прибегают в тех случаях, когда инфекционное или вирусное заболевание не может быть определено обычными методами. Она позволяет обнаружить болезнь даже на ранней стадии, когда внешних проявлений нет.
  • Исследование аллергических реакций. Молекулярная диагностика успешно применяется для определения аллергии: в отличие от традиционных методов, она более точна и при этом безопасна для пациента, так как отсутствует непосредственный контакт с аллергеном.
  • Индивидуальная оценка рисков развития наследственных заболеваний. Молекулярная диагностика помогает выявить у взрослых и детей опасность в будущем подвергнуться различным патологиям. Нужно отметить, что есть болезни, которые вызваны исключительно мутацией гена (моногенные) и те, которые обусловлены в том числе генетическими особенностями (мультифакторные). Информация о первых позволяет, к примеру, оценить риски передачи наследственных заболеваний от родителей к ребенку. Знание о предрасположенности к мультифакторной патологии необходимо еще и для профилактики болезней с помощью изменения образа жизни.
  • Перинатальная медицина. Как уже было сказано, молекулярная диагностика способна дать информацию о состоянии здоровья и генетических предрасположенностях человека. Это относится и к эмбрионам: анализ ДНК еще не родившегося ребенка позволяет распознать синдромы Дауна, Эдвардса, Патау, Тернера, Клайнфельтера. Также молекулярная диагностика применяется в области вспомогательных репродуктивных технологий: она позволяет установить генетические причины бесплодия и невынашивания беременности.
  • Фармакогенетика. Молекулярная диагностика объясняет, почему на некоторых действуют одни препараты, а на других — иные: все дело в генетических особенностях пациентов. Возможность определения эффективности веществ имеет особое значение при лечении тяжелых заболеваний, например, онкологических.
  • Спортивная медицина. Настоящие чудеса исследования ДНК и РНК творят и в области оценки спортивных перспектив. Например, родители малышей могут узнать о том, какой вид занятий принесет ребенку наибольшую пользу для здоровья или позволит достичь спортивных результатов.

На заметку В США побочные воздействия лекарств входят в пятерку самых распространенных причин госпитализации и смерти, а устранение ПВЛ обходится дороже, чем само лечение. Медики возлагают большие надежды на молекулярную диагностику: индивидуальный подбор препаратов с учетом генетических особенностей каждого (персонализированная терапия) должен решить эту проблему.

Итак, обращение к генетическим исследованиям актуально в тех случаях, когда пациент стремится получить сведения о состоянии своего организма. Обычно это необходимо в следующих ситуациях:

  • для постановки точного диагноза. Например, очень распространенным является неверное определение аллергена либо несвоевременная диагностика вирусного заболевания. Между тем от этого зависит успешность лечения;
  • для профилактики возможных патологий. Если пациенту известно о повышенном риске сердечно-сосудистых заболеваний или рака, он может предпринимать соответствующие меры, например, отказаться от вредных привычек;
  • для повышения эффективности лечения. К примеру, онкозаболевания имеют множество вариантов терапии. Выбор тактики лечения «методом проб и ошибок» приводит к потере драгоценного времени и здоровья, а иногда — и к летальному исходу;

Отдельной группой стоит выделить исследования ДНК, которые проводят в связи с планированием или рождением ребенка. Чаще всего родители обращаются в лабораторию, чтобы:

  • изучить свою генетическую совместимость, оценить риски наследственных заболеваний потомства;
  • исследовать состояние плода, выявить синдромы и опасные патологии;
  • диагностировать заболевания (и оценить риски) и аллергические реакции у малыша;
  • определить, какие спортивные занятия, какое питание и образ жизни будут наиболее полезны для ребенка, а чего стоит избегать;
  • установить отцовство или материнство.

Независимо от выбранного метода молекулярно-генетического исследования, оно будет включать в себя следующие этапы:

  • взятие биоматериала. Как уже было сказано, чаще для исследования используют кровь пациента. Полученный материал маркируют и транспортируют в лабораторию;
  • выделение ДНК/РНК;
  • проведение исследований в соответствии с выбранным методом;
  • изучение и интерпретацию результатов;
  • выдачу заключения.

Цитогенетический анализ позволяет выявить наследственные заболевания, психические отклонения, врожденные пороки развития. Суть метода — в изучении хромосом с помощью специальных микроматриц, нанесенных на ДНК-чипы. Для этого из образца крови выделяют лимфоциты, которые затем помещают на 48–72 часа в питательную среду и по истечении этого времени исследуют. Назначают такой анализ нечасто, в основном для изучения причин бесплодия и невынашивания беременности, для уточнения диагноза у детей при подозрении на врожденные заболевания. Анализ очень точен, но достаточно трудоемок и длителен (результат можно получить лишь через 20–30 дней после сдачи).

Достоинство и в то же время недостаток метода — в его специфичности: цитогенетика может выявить лишь небольшое количество патологий (например, аутизм), однако делает это практически без погрешностей.

Полимеразная цепная реакция — метод, изобретенный в 1983 году, по сей день самый популярный и фундаментальный в молекулярной диагностике. Характеризуется высочайшей точностью и чувствительностью, а также скоростью проведения исследования. Молекулярная диагностика ДНК/РНК методом ПЦР позволяет выявить такие патологии, как ВИЧ, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие.

Для анализа выбирают участок ДНК и многократно дублируют его в лаборатории с помощью специальных веществ. Для диагностики подходит большой перечень биоматериалов: кровь, слюна, моча, выделения из половых органов, плевральная и спинномозговая жидкость, ткани плаценты и т.д.

В данном молекулярном методе объектом исследования становятся уникальные нуклеотидные соединения отдельно взятой хромосомы или ее участок. Для этого используются меченые флуоресцентными маркерами короткие ДНК-последовательности (зонды), которые позволяют выявить фрагменты с атипичными генами. Биоматериал для анализа может быть любой: кровь, костный мозг, плацента, ткани эмбриона, биопсия и т.д. Важно, чтобы образец был доставлен в лабораторию сразу после его изъятия.

Метод особенно активно используют в онкологии (например, для наблюдения за остаточными злокачественными клетками после химиотерапии), а также в пренатальной диагностике (для определения риска развития у плода врожденных пороков), гематологии. FISH-метод очень чувствителен и точен для выявления поврежденных фрагментов ДНК (погрешность около 0,5%), при этом достаточно быстр: результат придется ждать не более 72-х часов. Однако у него есть и недостатки: FISH еще более специфичен, чем микроматричный цитогенетический анализ, и может служить лишь для подтверждения или опровержения предполагаемого диагноза.

Этот метод похож на предыдущий — здесь так же используются меченные флуоресцентом последовательности ДНК. Однако эти зонды сначала выделяют из проб, полученных от пациента, и затем сравнивают с образцами, нанесенными на микрочипы. ДНК-микрочип представляет собой основание (стеклянное, пластиковое, гелевое), на которое может быть нанесено до нескольких тысяч микротестов длиной от 25 до 1000 нуклеотидов. Полученные после очистки биоматериала пробы (зонды) совмещают с микротестами на чипе и наблюдают за реакцией маркёров. Результаты исследования готовы через 4–6 дней после забора материала.

Для анализа используется любой биоматериал, из которого можно получить образец ДНК/РНК. Используют такой метод в онкологии и кардиологии (в том числе для изучения генетической предрасположенности), он точен и чувствителен, однако в России его применяют редко — в этом его главный минус.

Итак, молекулярная диагностика — неинвазивный и точный метод обследования организма с широким спектром применения в разных областях медицины. Если на Западе исследования ДНК/РНК уже распространены повсеместно, то в России подобную услугу предлагают далеко не все клиники.

Подробную информацию можно узнать по телефонам: (812) 235-01-10; (812) 230-86-30 — отдел страховой медицины (платные услуги).

В настоящее время в нашей лаборатории проводится анализ ПЦР на:

Бактериальные инфекции, Вирусные инфекции, ДНК-диагностика тканевой совместимости, Грибковые инфекции, Инфекции пищеварительного тракта, Урогенитальные инфекции, Исследование хромосомного аппарата, Генодиагностику и др.

источник

Молекулярно-генетическое тестирование является неотъемлемой частью обследования и лечения онкологических больных во всем мире.

Причина появления опухоли – это мутации, т.е. генетические нарушения, возникшие в одной из миллиардов клеток человеческого организма. Эти мутации нарушают нормальную работу клеток, что приводит к их неконтролируемому и неограниченному росту, воспроизведению и распространению по организму — метастазированию. Однако наличие таких мутаций позволяет отличать опухолевые клетки от здоровых и использовать это знание при лечении больных.

Анализ опухоли каждого конкретного пациента и формирование индивидуального перечня потенциальных молекул-мишеней стало возможным благодаря внедрению методик молекулярно-генетического анализа в клиническую практику. Научная лаборатория молекулярной онкологии НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова выполняет полный спектр современных молекулярно-генетических исследований для онкологических пациентов и их родственников.

  • Пациентам с установленным онкологическим диагнозом – поможет подобрать эффективную лекарственную терапию.
  • Пациентам моложе 50 лет с диагнозом рак молочной железы, рак яичников, рак желудка или рак поджелудочной железы – определить наличие онкологической предрасположенности и скорректировать лечение.
  • Здоровым людям с неблагоприятной семейной «онкологической историей» – определить наличие онкологической предрасположенности и заблаговременно провести профилактические мероприятия по раннему выявлению опухоли.

НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова осуществляет полный комплекс мероприятий, связанных с диагностикой наследственной предрасположенности к раку молочной железы.

Любой человек является носителем каких-то мутаций, опасных либо для нас, либо для потомства. Первое направление исследований онкогенетиков – выявление наследственных мутаций с помощью секвенирования генома. Второе направление – исследование собственно опухоли, спектра приобретенных клеткой мутаций, в связи с которыми она возникла. Для этого тоже требуется исследование генома всего организма, чтобы сравнить последовательность ДНК опухоли с последовательностью ДНК в организме. Поэтому в будущем оно потребуется для лечения любой опухоли.

Для того, чтобы пройти генетическое обследование в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова не обязательно приезжать в Санкт-Петербург. Научная лаборатория молекулярной онкологии принимает материалы для исследований по почте. Послать отправление можно письмом или бандеролью как почтой России (средний срок доставки – 2 недели), так и экспресс-почтой (срок доставки 2-3 дня).

Пожалуйста, внимательно ознакомьтесь с информацией о том, куда и как отправлять биологические материалы, чтобы они сохранными дошли до НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, а также о том, как оплатить исследования и получить результат:

Материалы, которые необходимы для исследования:

  • все патоморфологические материалы: парафиновые блоки и стекла. При низком качестве срезов или для выявления важных деталей могут понадобиться дополнительные срезы;
  • венозная кровь.

Документы, которые необходимо вложить в бандероль:

  • заполненное врачом направление на молекулярно-генетическое исследование
  • копии паспортов пациента и плательщика — разворот с основной информацией + прописка (необходимо для предоставления платежной квитанции)
  • контактная информация:
    — номер мобильного телефона (для SMS-оповещения о готовности анализа)
    — адрес электронной почты (для отправки результата на электронную почту)
  • копия выписного эпикриза или консультационного заключения (при наличии)
  • копия гистологического заключения предоставляемого материала (при наличии)

Цены на молекулярно-генетические исследования указаны в прейскуранте, раздел 11.9

Для каких молекулярно-генетических исследований необходима кровь пациента:

  • наследственных мутаций (BRCA1,2 и т.д.)
  • полиморфизм UGT1A1*28
  • выявление коделеции 1p/19q + блоки и стекла
  • подтверждение принадлежности патоморфологического материала пациенту

Особенности отправки пробирок с кровью

  • Необходимый объем венозной крови 3-5 мл.
  • Забор крови может производиться в любое время суток вне зависимости от приема пищи.
  • Кровь отбирается в пробирки с ЭДТА (фиолетовая крышка).
  • Для перемешивания крови с антикоагулянтом, которым пробирка покрыта изнутри, закрытая пробирка должна быть несколько раз плавно перевернута вверх дном.
  • При комнатной температуре пробирка с кровью может транспортироваться в течение двух недель.

Важно! Возврат блоков и стекол по почте временно не производится. необходимо забрать свои материалы в НМИЦ онкологии самостоятельно, либо представителю пациента по доверенности.

Не забывайте вкладывать документы в посылку. Обязательно оставляйте номер телефона и адрес электронной почты.

источник

Генетический анализ крови — вид лабораторного исследования, позволяющий провести оценку хромосом человека для выявления патологических состояний. А также данное исследование используется для установления степени родства или для профилактики.

Виды генетического анализа

Когда может быть назначен генетический анализ крови

Генетический анализ новорождённых

Генетический анализ как ключевой метод предиктивной медицины

Есть ли противопоказания и ограничения?

Расшифровка результатов генетических исследований

В зависимости от цели проведения исследования выделяют следующие виды генетического анализа:

Анализ крови ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) – это исследование, позволяющее идентифицировать человека в процессе изучения уникальной последовательности нуклеотидов. Данный «генетический след», является индивидуальным для каждого человека (за исключением однояйцевых близнецов) и в течение жизни не изменяется.

Молекулярно-генетические исследования крови позволяют определить:

  1. Возможные заболевания. Исследование биологического материала на ДНК позволяет вовремя обнаружить наследственные болезни. Если в семье зафиксированы случаи психического расстройства или онкологии, с помощью данного теста определяется предрасположенность к развитию у потомков схожей проблемы.
  2. Индивидуальную непереносимость медикаментов. В случаях, когда имеются подозрения на повышенную чувствительность к определённой группе препаратов, может быть показан ДНК-анализ.
  3. Степень родства. Одной из самых частых причин для проведения исследования является необходимость установления родственных связей между людьми.
  4. Факторы бесплодия. В репродуктивных центрах парам, имеющим трудности с зачатием, в обязательном порядке назначают ДНК-тест.
  5. Склонность к развитию алкоголизма или наркомании. Подобную предрасположенность можно установить за счёт определения генов, ответственных за синтез ферментов для расщепления молекул алкоголя и других соединений.

Под кариотипированием понимают методику цитогенетического анализа, благодаря которому удаётся исследовать хромосомный набор человека. Подобное обследование проводится среди супружеских пар желающих завести ребёнка.

Кариотип – хромосомный набор каждого человека, содержащий полную характеристику признаков всех его составляющих, их:

В геноме человека содержится 46 хромосом, которые, в свою очередь, делятся на 23 пары.

Аутосомные (первые 44) — предназначены для передачи наследственных признаков:
(цвет волос, глаз, анатомические особенности).

Последняя хромосомная пара является половыми хромосомами, с помощью которых удаётся определить кариотип:

Основными задачами назначения кариотипирования являются:

  1. Определение несоответствия в хромосомном наборе супругов. Анализ проводится для предотвращения рождения детей с пороками развития или другими генетическими патологиями.
  2. Выявление количества и принадлежности хромосом, характеристика их структуры.
  3. Установление причины бесплодия, проявляющиеся в изменении кратности хромосом.

Помимо личной инициативы, врач часто рекомендует сделать генетический анализ вследствие определённых факторов.

Среди обязательных медицинских показаний для проведения исследования выделяют следующие:

  • проживание в экологически неблагоприятной местности;
  • бесплодие, у которого не установлена причина;
  • возраст от 35 лет (проводится даже среди пар, где хотя бы один супруг старше 35 лет);
  • безуспешные многократные попытки искусственного оплодотворения;
  • патологии в развитии сперматогенезе без установленной причины;
  • гормональные нарушения у женщины;
  • наличие генетических заболеваний в роду;
  • постоянный контакт химическими веществами;
  • браки между близкими родственниками;
  • зафиксированные случаи самопроизвольного прерывания беременности, включая преждевременные роды и мертворождение.

Своевременно проведённый тест ДНК показывает пороки развития малыша ещё до его рождения, поможет составить генетическую карту ребёнка. Чаще всего в этом случае назначают исследование «генетическая двойка».

Для проведения анализа необходимо провести забор биологического материала не только матери, но и плода. При этом в процессе исследования происходит проникновение через брюшную полость женщины. Метод инвазивной диагностики позволяет окончательно подтвердить поставленный предварительно диагноз, но несёт определённую угрозу для малыша.

Особенности проведения анализа:

  1. Провести тест можно уже в первом триместре беременности, для исследования берётся венозная кровь.
  2. Анализ генетической двойки подразумевает изучение специфических белковых структур (бетта-ХГЧ и РРАР-А), которые считаются основным показателями наличия генетических патологий.
  3. Назначается в комплексе с УЗИ матки и анализом на кариотип родителей. Для изучения кариотипа берётся кровь из пуповины малыша.
  4. В заключение врач оценивает степень и риски развития наследственных патологий у ребёнка, назначает лечения и фиксирует данные в генетической карте.

Методики неинвазивной диагностики появились в ответ на возможные осложнения и риски при проведении инвазивного генетического анализа. Самым востребованным таким методом является Tranquility NIPT.

  1. Для получения ДНК-результата необходимо исследовать кровь матери. Начиная с первого месяца беременности, в материнском организме активизируется циркуляция фетальных клеток. Ближе к концу первого триместра их концентрация достигает предела, что достаточно для определения в генетическом анализе.
  2. Исследование отличается высоким показателем достоверности. Точность диагностирования синдрома Дауна составляет более 99,9%.
  3. Тест не представляет угрозу для развития плода или здоровья матери.
  4. Исследование проводится на 10-12 недели беременности.
  5. Результаты готовятся в течение 15 рабочих суток.

При своевременном диагностировании патологий и правильно подобранном лечении многие проблемы удаётся решить с рождения.

  1. Для анализа на генетические заболевания берётся кровь. У доношенных малышей забор производится на 4 день после рождения, а у недоношенных – на 7 сутки.
  2. При подозрении на наличие у ребёнка генетической патологии врач назначает дальнейшее обследование. Разновидность диагностики зависит от характера заболевания.
  3. Генетический анализ новорождённых позволяет вовремя определить наличие таких патологий, как: муковисцидоз, адреногенитальный синдром, фенилкетонурия и другие.
  4. Для получения дополнительной информации или диагностики иных заболеваний назначают тест ДНК. В качестве биологического материала используется венозная кровь.

Установление родства используется не только в медицинской сфере, но и часто необходимо для разрешения юридических спорных ситуаций. Так как родители передают ребёнку свой генетический материал, у родственников при таком анализе выявляются совпадающие участки. Высокий процент совпадений, значит большую вероятность доказать родство.

В отличие от других генетических тестов, биологический материал для анализа на отцовство можно брать с разных участков тела. Чаще всего используется соскоб внутренней части щеки. Анализ на отцовство – длительный процесс. Но в этом случае лучше довериться специалистам и выждать время, когда результаты многократно сравнят.

Точность установления родства при данном методе составляет больше 99%.

Инструкция по забору материала для выполнения генетического теста на установление отцовства на дому. Ролик взят с канала Евгения Иванова.

Изучение генетического материала позволяет выявить возможные болезни в будущем. Связано это с тем, что не все сбои генотипа заканчиваются той или иной патологией. В большинстве случаев важную роль играют и факторы окружающей среды. Если своевременно сделать ДНК-тест, можно избежать развития многих неизлечимых заболеваний.

К таким патологиям относят:

  • атеросклероз;
  • сахарный диабет;
  • бронхиальная астма;
  • гипертоническая болезнь;
  • онкология.

Благодаря развитию медицины, на данный момент доступно несколько методик, позволяющих исследовать генетическую информацию. Каждая вариант подбирается в зависимости от возможностей и случая.

  1. Микрочип-технология. В процессе проведения диагностики используется ДНК-чип, созданный по аналогии с электронным чипом для выделения множественных цепочек ДНК. Современные микрочипы способны определить миллоны различных мутаций и вымерять экспресиию генов. Сама микросхема изготавливается из стекла или силикона, на которую в процессе машинной печати наносится ДНК.
  2. Сравнительная геномная гибридизация. Технология подразумевает анализ изменения количества копий относительных уровней плоидности в исследуемом материале в соотношении с контрольным образцом, являющимся эталонным.
  3. FISH-технология. Принцип работы метода основан на явлении гибридизации — связыванием ДНК исследуемого образца пациента с ДНК-зонда.
  4. Полимеразная цепная реакция. Методика подразумевает стремительное увеличение концентрации выделенных участков ДНК в биологическом материале человека для определения той или иной патологии.

Предиктивная функция генетического анализа заключается в предсказании развития возможных патологий.

Для того чтобы сделать генетический анализ, врачи не определяют существенных противопоказаний и ограничений. Процедура допустима к проведению людям любого возраста и беременным женщинам. Единственное замечание, если речь идёт о будущих матерях, проводить инвазивный генетический тест рекомендуют после 18 недель.

Перед проведением исследования желательно исключить следующее:

  • курение;
  • употребление алкогольных напитков;
  • поцелуи;
  • употребление жевательной резинки.

Основной биологический материал для исследования – кровь. Чаще всего необходима именно венозная кровь.

  1. Перед процедурой пациент в обязательном порядке заполняет анкету. Важно предоставить точные данные, так как это может существенно повлиять на результат анализа.
  2. Далее пациента проводят в кабинет, где происходит забор материала. Сдавать анализ крови лучше натощак преимущественно в утреннее время.
  3. Полученные биологический материал помещается в пробирку и отправляется на исследование в лабораторию.

Интерпретацией полученных результатов на генетические заболевания должен заниматься исключительно специалист-генетик. Только опытный специалист может правильно составить заключение на основании полученных данных. Процесс подготовки и сама расшифровка длятся от нескольких недель до месяца.

Цена на услуги генетического исследования в ОН Клиник:

Наименование Цена, руб
Генетический риск нарушения системы свертывания 5000
Генетический риск гипергомоцистеинемии 2500
Иммунологическая совместимость партнеров (HLA-типирование) 4500
Андреногенитальный синдром 7500
Синдром поликистозных яичников 3500
Полиморфизм генов, кодирующих ферменты метаболизма 4500
Генетические факторы мужского бесплодия 4000
Риск развития остеопороза 9000
Генетическая непереносимость лактозы 1500
Фармакогенетика: чувствительность к варфарину 3500
Предрасположенность к раку молочной железы (BRCA) 4000
Риски развития артериальной гипертензии 3500
Восприимчивость к интерферону и рибаверину у больных вирусным гепатитом С 2500
Определение пола плода (с 9 недели беременности) 3500
Определение резус-фактора плода (с 11 недели беременности) 3000
Предрасположенность к целиакии 3000
Муковисцидоз 3000
Цены актуальны для трех регионов: Москва, Челябинск, Краснодар.

Цены на услуги в Лечебно-диагностический центр «Кутузовский»:

Наименование Цена, руб
Исследование фактора репродуктивности AZF (локусы A, B, C) 7370
Генетический риск нарушений системы свертывания (F2, F5, F7, FGB, F13A1, SERPINE1, ITGA2, ITGB3 — 8 точек) 5630
Генетические дефекты ферментов фолатного цикла (MTHFR, MTR, MTRR — 4 точки) 3760
Генетическая предрасположенность к гипертонии (AGT, ADD1, ACE, AGTR1, AGTR2, CYP11B2, GNB3, NOS3 — 10 точек) 10390
Генетический риск осложнений беременности и патологии плода (F2, F5, F7, FGB, F13A1, SERPINE1, ITGA2, ITGB3, MTHFR, MTR, MTRR — 12 точек) 8455
Генетическая предрасположенность к остеопорозу (кровь) 6590
Генетический тест на лактозную непереносимость: MCM6: -13910 T> C 1880
Диагностика синдрома Жильбера (мутация гена UGT1) 3930
Врожденная дисфункция коры надпочечников (мутация гена CYP21OHB — 10 показателей) 9550
Генетические факторы развития синдрома поликистозных яичников, (кровь) 3300
Определение SNP в гене IL28B человека 2560
Исследование кариотипа (кариотипирование) 9220
Генетически обусловленная чувствительность к варфарину (VKORC1, CYP2C9, CYP4F2 — 4 точки) 3760
Система свертывания крови. Исследование полиморфизмов в генах: F5 (мутация Лейден, Arg506Gln) и F2 (протромбин 20210 G> A) 2310
Варфарин. Определение терапевтической дозы. Исследование полиморфизмов в генах: VKORC1-1639/3673, CYP4F2 V433M, GGCX rs11676382, CYP2C9*2, CYP2C9*3, CYP2C9*5, CYP2C9*6 4000
Цитогенетическое исследование клеток костного мозга (методом FISH) 14030
Цены актуальны для трех регионов: Москва, Челябинск, Краснодар.

О том, стоит ли делать генетический тест и расшифровку ДНК, рассказывается в видео, снятом каналом «Чудо Техники».

источник

Являются на сегодняшний день единственной возможностью выявить предрасположенность к болезням задолго до их появления.

С точки зрения генетики все болезни можно разделить на три вида:

Наследственные заболевания — вызваны различными генными дефектами, к таким заболеваниям относятся: синдром Дауна, гемофилия, дальтонизм и другие.

Ненаследственные заболевания — это различные инфекционные заболевания, травмы, ожоги. Генетические факторы в этом случае могут повлиять только на уже развившееся заболевание.

Заболевания с наследственной предрасположенностью (мультифакторные заболевания) — объединяют в своем происхождении несколько факторов: влияние окружающей среды и наследственность. К таким заболеваниям относятся диабет, остеопороз, гипертония, бронхиальная астма, псориаз, эндометриоз, шизофрения, рак молочной железы и прочие онкологические заболевания.

Информация о большинстве известных заболеваний «записана» в генах человека. Считав эту информацию с помощью генетического анализа, стало возможным предупредить развитие таких заболеваний как сахарный диабет, онкологические заболевания и многие другие, зная предрасположенность к данным заболеваниям.

Лицам с отягощенной наследственностью по онкологическим, сердечно-сосудистым, психическим, эндокринным заболеваниям, желающим знать насколько велик для них риск этих заболеваний.

Людям, подвергающимся неблагоприятным факторам окружающей среды (стрессы, профессиональные риски, неправильное питание).

Женщинам и мужчинам,
страдающим бесплодием.

I. Моногенные генетические заболевания (синдром Жильбера, лактазная недостаточность).

II.

Определение генетически опосредованного риска развития онкологических заболеваний:

  1. Определение генетически опосредованного риска развития рака молочной железы и яичников.
  2. Определение генетически опосредованного риска развития рака толстой кишки:
    • наследственный неполипозный рак толстой кишки;
    • десмоидные опухоли: семейный аденоматозный полипоз, полипозный рак толстой кишки.
  3. Определение генетически опосредованного риска развития рака щитовидной железы:
    • синдром множественной эндокринной неоплазии второго типа;
    • медуллярный рак щитовидной железы.
  4. Определение генетически опосредованного риска развития рака желудка.
  5. Генетически опосредованный риск развития рака тела матки.
  6. Определение генетически опосредованного риска развития рака предстательной железы.
  7. ДНК-диагностика ранних стадий и предпосылок развития рака толстой кишки.
  8. Определение предпосылок для эффективного терапевтического лечения немелко-клеточного рака легкого гефатинибом.
  9. Идентификация рекомбинации генов ABL/BCR при лейкозах (Филадельфийская хромосома).

III. Определение генетически опосредованного риска развития мультифакторных заболеваний.

  1. Определение генетически опосредованного риска развития гипертонической болезни.
  2. Определение генетически опосредованного нарушения липидного обмена (эндотелиальная дисфункция).
  3. Определение генетически опосредованного риска развития остеопороза (профилактика остеопороза).
  4. Определение генетически опосредованного риска возникновения тромбофилических состояний.
  5. Определение генетически опосредованного риска возникновения ревматоидного артрита.
  6. Оценка метаболизма и эффективности действия лекарственных препаратов.
  7. Определение генетически опосредованного риска развития преэклампсии.
  8. Определение генетически опосредованного риска развития сахарного диабета 1 типа.
  9. Определение генетически опосредованного риска развития сахарного диабета 2 типа.
  10. Определение генетических причин нарушений репродуктивных функций.

источник

Здравствуйте
Мне 26 лет
Я замужем 5 лет – все это время предохранялись
1 год пила – логест(уже прошел год как не принимаю)
А теперь решила забеременеть
Менструальный цикл проходит всегда очень болезненно.
Половые отношение тоже с небольшой резью.
Болезненность клитора иногда.
В первый раз у меня случилась задержка в этом месяце на 9 дней.(врач послала на анализ крови из вены,но на следующий день началась менструация)
Анализ показал
Хкг 0.001
Прогестерон 0.71
Врач сообщила что забеременеть не смогу,а если вдруг смогу то будет выкидыш
На 13 день цикла провели ультрозвуковое исследование органов малого таза
Гинекология
Матка размер 44*35*46мм
Миометрий норма
Эндометрий 8мм,соответствует пролиферативной фазе цикла
Шейка 29-31мм-норма
Цервикальный канал-норма
Полость матки-норма
Позадиматочное пространство-экссудат не определяется
Правый яичник 31*12*19,преовуляторный фолликул -21мм
Левый яичник-28*17*19
Паренхима-норма
Кортикальный слой-норма
Капсула яичников—норма
Параметральные области норма
Заключение-узи признаки нормы

Прописала витамины
Я сообщила что у меня постоянные выделения-до этого обращалась микробы не находили,говорили наверное после антибиотиков,ноя уже год не принимаю антибиотики и мало болею
Выделения разные но очень обильные попеременно иногда как яичный белок,иногда желтоватые.
Мерила температуру на всякий случай-на несколько градусов пониженная(видимо врожденная)

Доктор начала осмотр и взяла анализы
Осмотрев меня направила на кольпоскопию.
Заключение кольпоскопии
15+ I +II
На шейки матки имеются обильные серые выделения.Наружный зев поперечный ,стык эпителиев расположен на эктоцервиксе,эктопия мелко-зернистая,окружена узкой зоной трансформации.Эктоцервикс гиперемирован.Стенки влагалища гладкие.Проба Шиллера- эктопия окрасилась в розовый цвет,периферия эктоцервикса – в темно-коричневый цвет.У входа во влагалище ,на малых половых губах имеются множественные остроконечные кондиломы.
Эктопия врожденная.Узкая зона трансформации.Кольпит.Остроконечные кондиломы влагалища и вульвы.
Рекомендуется скрининг ВПЧ и ПАП-тест после санации.

И еще врач сказала что есть загиб матки

Результаты анализов проведенных на 13й день цикла
Молекулярная диагностика
Хламидия трахомадис– отрицательно
Микоплазма хоминис – отрицательно
Уреплазма парвум – отрицательно
Уреплазма уреалитикум-отрицательно
ХПВ скрининг(16,18,31,33,35,39,45,52,58,59,67)-отрицательно
ХПВ генотип(16,18,31,39,45,59,33,35,56,51,52,58)-отрицательно
ХПВ 6/11-отрицательно
ХПВ 16/18-отрицательно
ХПВ 16/18 (титр)- 10(5) копия 10(5) – высоко

Эпителий v (много) c (мало) u(мало)
Флора v(палочковидные) c (-) u(палочковидные)
Лейкоциты v(15-40 гс) c (4-15 гс) u(0-1гс)
Диплококки не обнаружены
Трихомонос ваг. не обнаружены
Грибки(…….) псевдомисели

Могли бы Вы мне помочь с диагнозом и лечением
Если необходимы еще анализы – я пройду их
Может ли быть данное состоянии –предшествием какой либо страшной болезни
Возможна ли беременность
Нужно ли пройти анализы мужу-пойти на проверку к врачу
Заранее спасибо.

Добрый день. 2 мая был незащищенный секс. Партнер уверял и уверяет, что ВИЧ у него нет. Решила сдать анализы.

28 мая сдала СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ИНФЕКЦИЙ:

— ДНК гепатит B (кровь). не обнаружено МЕ/мл Нормальные значения: не обнаружено. Аналитическая чувствительность метода: 50 МЕ/мл.
— РНК гепатит C (кровь). не обнаружено МЕ/мл Аналитическая чувствительность метода: 100 МЕ/мл.
— РНК ВИЧ (кровь). не обнаружено копий/мл Аналитическая чувствительность метода: 200 копий/мл

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ ПЦР (кровь):РНК ВИЧ (кровь). не обнаружено копий/мл Аналитическая чувствительность метода: 200 копий/мл

6 июня повторила анализы:
— РНК ВИЧ (кровь)не обнаружено МЕ/мл Аналитическая чувствительность: 20 МЕ/мл.
— Антитела и антигены к ВИЧ не обнаружено
Антитела к ВИЧ 1, 2 классов IgM, IgG. Антиген р 24.
Методика ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo, LOT 37212LI00H, срок годности
реагента 16.11.2014.

Анализы отрицательные, но паника и страх не проходят. По какой схеме мне действовать теперь? На сколько я могу быть уверенной, что ВИЧ у меня нет? Сегодня (9 июня) появилась боль в горле. Хотя, была и до этого. Вообще, видимо на фоне моей паники и страха, заработала себе остеохондроз. уже 3 недели маюсь болью в шее и в плечевом поясе. боль в горле.
Дайте совет. Очень страшно. Заранее спасибо за ответ.

Синдром Жильбера – семейная желтуха, обусловленная неконъюгированной, негемолитической гипербилирубинемией, относится к разряду печеночных паренхиматозных желтух, носит доброкачественный характер (уровень билирубина в крови в пределах 17-85 мкмоль/л –.

В последние годы усилия онкологов сконцентрированы на разработке иммуноцитохимических и молекулярно-генетических методов диагностики морфологически сходных, но различных по происхождению опухолей детского возраста.

История изучения вирусных гепатитов (ВГ) начинается с 1965 года, когда Б. Бламберг при исследовании сыворотки крови австралийского аборигена обнаружил антиген, образующий линии преципитации при реакции с сывороткой крови больного гемофилией.

Прошло более 20 лет с тех пор, как эндотелий сосудов перестали рассматривать как пассивную внутреннюю выстилку сосудов, обеспечивающую лишь перемещение форменных элементов крови. Сейчас уже ясно, что эндотелий представляет собой своеобразную.

Долгожители — представители максимальной видовой продолжительности жизни человека. Поиск механизмов и факторов, определяющих долголетие, осуществляется на различных уровнях — от популяционного до молекулярно-клеточного. Долгожители.

Молекулярно-цитогенетическая диагностика является современным направлением в клинической цитогенетике, цель которой – разработка и применение новых высокоэффективных методов анализа хромосомопатий.

Муковисцидоз (МВ) – наиболее распространенное наследственное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, универсальная экзокринопатия. Естественное течение заболевания тяжелое и в 80% случаев заканчивается летально в первые годы жизни.

Синдром Криглера-Найяра наследственная желтуха, обусловленная частичным или полным отсутствием в печени фермента, расщепляющего билирубин. Этиология Относится к разряду печеночных паренхиматозных желтух. Характер течения зависит от типа (разновидности).

Под атрофическим гастритом понимают прогрессирующий воспалительный процесс слизистой оболочки желудка, характеризующийся утратой желудочных желез.

Ученым из Гонконга удалось создать первый в мире миниатюрный чип, который необходим для проведения полимеразной цепной реакции (polymerase chain reaction) — высокочувствительного метода тестирования, применяющегося в молекулярной генетике

Американские онкологи идентифицировали сразу несколько новых маркеров злокачественных опухолей мочевого пузыря. Открытие позволяет не только выявлять опасную болезнь на ранних стадиях, но и прогнозировать степень агрессивности рака.

Еще недавно казавшаяся абсолютно фантастической идея крохотной медицинской лаборатории, которая в любой момент может выдать результаты анализа крови по очень многим показателям, становится реальностью. Причем реальность превосходит все самые смелые фантазии – австралийский ученый, используя биочип на шелковой основе, создал прототип крохотной лаборатории размером с почтовую марку. Исследователь утверждает, что опытные работающие образцы могут быть созданы не позднее, чем через 4 года.

Ученые из Института исследования рака Даны Фабер (Dana-Farber Cancer Institute) в Бостоне открыли неизвестные ране молекулярные механизмы, которые приводят к образованию новых кровеносных сосудов, когда определенные участки тела подвергаются недостаточной циркуляции крови

Серьезный недостаток сна приводит в действие иммунную систему, имитируя немедленную реакцию иммунитета на воздействие стресса на организм. К такому выводу пришли голландские и британские ученые, которые надеются, что результаты их работы помогут объяснить связь между хроническим недосыпанием и проблемами со здоровьем.

Низкий уровень содержания витамина Д в крови человека всегда ассоциировался с повышенной угрозой развития опасных заболеваний, тогда как прием специальных пищевых добавок на основе витамина Д воспринимается, как способствующий излечению от многих болезней. Однако новое исследование описывает иной, более широкий подход к вопросу оптимального уровня витамина Д в организме человека

Ученые нашли причину того, почему люди преклонного возраста начинают терять зрение. Высокий уровень содержания С-реактивного белка в крови, который часто связан с протеканием воспалительных процессов, оказывается также в ответе за макулярную дегенерацию

Большинство людей пребывают в уверенности, что возможность прожить 100 и более лет обеспечивает хорошая наследственность. Однако ученые, которые изучали свойства генов людей, доживших до 110 лет, не смогли обнаружить никаких «чудесных» мутаций.

В свое время (более 70 лет тому назад – в 1928 году) индийский ученый Ч.Раман сделал открытие, которое двумя годами позже принесло ему Нобелевскую премию в области физики. Раман обнаружил явление комбинационного рассеяния света. Многие годы открытие Рамана интересовало лишь ученых, но с изобретением лазера, а позднее оптико-волоконных методов передачи сигнала оно получило вторую жизнь. Американские ученые придумали методику, основанную на Рамановской спектроскопии, которая позволяет с помощью небольшого лазерного зонда размером с шариковую ручку быстро и точно определять наличие в человеческом организме даже крохотных злокачественных опухолей, кариеса, остеопороза и некоторых других заболеваний.

источник

Для изучения и выявления вариантов в структуре ДНК применяется молекулярно-генетический метод. Для каждого участка ДНК, который исследуется, регион это хромосомы, ген или аллель, методы отличаются. В основе каждый молекулярно-генетический метод содержит те или иные манипуляции с РНК и ДНК. Все данные методы отличаются огромной сложностью, без лабораторных условий проводиться не могут, и персонал должен быть высококвалифицированный. Проводится эта работа в несколько этапов.

Сначала образцы РНК или ДНК нужно получить. Здесь молекулярно-генетический метод может применяться по отношению к практически любому материалу: капля крови, лейкоциты, культура фибропластов, слизистая оболочка (соскоб), даже волосяные луковицы, — ДНК можно получить из любого образца. Она пригодна для того, чтобы применить любой молекулярно-генетический метод и различные их варианты, а уже выделенная ДНК долго хранится в заморозке. Второй этап посвящён накоплению нужных фрагментов (амплификации) ДНК, обеспечить же его помогает цепная полимеразная реакция in vitro (в пробирке, без участия живого организма). В результате выбранный фрагмент ДНК размножается с помощью этой цепной реакции, и количество ДНК возрастает буквально в миллион раз.

Третьим этапом молекулярно-генетических методов исследования предполагается рестрикция размноженных ДНК (это фрагментирование, разрывание или разрезание). Рестрикция проводится с помощью электрофореза на полиакриламидном или агарозном геле. Этот молекулярно-генетический метод изучения ДНК позволяет каждому фрагменту занять в геле определённое положение. После этого гель обрабатывается этидием бромида, способным связываться в ДНК, проводится облучение ультрафиолетом, после чего можно наблюдать участки свечения. Молекулярно-генетические методы диагностики разнообразны и многочисленны, однако первые два этапа характерны для всех. А вот для того, чтобы выявить фрагменты ДНК, гель можно окрашивать и многими другими существующими способами.

К самым прямым и распространённым способам обнаружения микобактерий можно отнести вышеописанный молекулярно-генетический метод изучения ДНК. Сущность его состоит в том, чтобы выявить в диагностическом материале специфические фрагменты цепочки ДНК-возбудителей. Молекулярно-генетические методы диагностики пока не имеют более эффективного способа распознавать такое заболевание, как туберкулёз. Применяя полимеразную цепную реакцию (ПЦР), можно быть уверенным, что исходная ДНК увеличит количество копий в миллион раз, то есть произойдёт амплификация, и это позволит визуализировать результаты. Уровень чувствительности здесь очень высок — более девяноста пяти процентов, что и является главным достоинством данного метода.

Остальные молекулярно-генетические методы исследования по эффективности уступают многократному копированию буквально вдвое, поскольку в этом случае редакционная проба показывает специфическую олигонуклеотидную последовательность возросшей в сто шесть раз. Даже культуральная диагностика туберкулёза органов дыхания значительно ниже по своей чувствительности. Именно поэтому современная медицина опирается на молекулярно-генетические методы диагностики туберкулеза. А описанный метод особо эффективен при встрече с возбудителями высокой антигенной изменчивости, определить которые другим способом гораздо более сложно — требуются особые питательные среды и длительное время культивирования. Биохимический и молекулярно-генетический методы дают совершенно разные по эффекту результаты.

Выстраивают ПЦР-диагностику туберкулёза наиболее часто с использованием тех последовательностей ДНК, которые специфичны для всех четырёх видов этого заболевания. Для достижения поставленной цели чаще всего используют праймеры, выявляющие последовательности IS элементов (IS-986, IS-6110), так как эти мигрирующие элементы характеризуют сугубо виды микобактерий туберкулёза и всегда присутствуют несколькими копиями в геноме. Также выделение ДНК можно осуществить из чистых культур и клинических (мокрота больных) любым другим приемлемым методом. Например, есть метод Boom, где используется лизирующий буфер на основе гуанидина, двуокиси кремния и тиоционата как носителя ДНК. Число больных, отличающихся скудным бактериовыделением, с каждым годом увеличивается, и потому в клинической практике утвердился совершенно другой уровень организации: молекулярно-генетический метод изучения ДНК играет уже главную роль в диагностике.

Однако нужно признать, что и он не без недостатков. Применение ПЦР-метода часто приносит огромное количество ложноположительных результатов, и виной здесь не только технические погрешности, но и особенности самого метода. Помимо всего прочего, с помощью данного способа диагностики определить степень жизнеспособности микобактерий, которые выявлены, просто невозможно. Но и этот недостаток не самый главный. Молекулярно-генетические методы ПЦР-диагностики влекут за собой опасность контаминации микобактериальных ДНК. Сертификационные требования по этой причине для ПЦР-лабораторий разработаны исключительно жёсткие, они требуют наличия трёх изолированных помещений. Технология ПЦР современная и очень сложная, её использование требует соответствующей аппаратуры и высококлассно подготовленного персонала.

При установлении диагноза результаты ПЦР-исследования обязательно должны сопоставляться с остальными данными: клиническое обследование, рентгенография, микроскопия мазка, посев и даже ответ на специфическое лечение здесь очень важны. В этом ряду исследований ПЦР является только одним из компонентов. Обнаружить возбудитель в самом начале диагностики можно наиболее простыми и быстрыми методами — бактериологическими.

Здесь используется световой микроскоп (окраска по Цилю-Нильсену) и люминесцентный (окраска флюорохромами). Преимуществом бактериоскопии является быстрота получения результатов. А недостатком её справедливо считается ограниченность возможностей из-за низкой чувствительности. Однако именно этому методу отдана рекомендация ВОЗ как наиболее экономичного и основного для выявления больных туберкулёзом. Обнаружение микобактерий бактериологическим методом имеет значение прогноза, и оценивается бактериовыделение количественно. Гораздо увереннее с этим справляются молекулярно-генетические методы исследования туберкулеза.

Лучшим выявлением микобактерий признают культуральные исследования. Посев патологического материала производится в яичные среды: Мордовского, Финна II, Левенштейна-Йенсена и тому подобные. Ориентировочным показателем развития устойчивости микобактерий к препаратам и косвенным свидетельством эффективности является количество микобактерий или их колоний в пробирке, если применён культуральный метод исследования. Чтобы повысить процент выделения микобактерий, посев патологического материала проводится на несколько сред.

Удовлетворяя многочисленные культуральные потребности, возбудителю в том числе предоставляют и жидкие среды. Используются при этом и автоматизированные системы учёта роста типа ВАНТЕС. Посевы должны провести в инкубации до семи-восьми недель. К этому времени посев с отсутствием роста можно считать отрицательным. Самым действенным способом выявления микобактерий туберкулёза считают биологические пробы: заражают диагностическим материалом морских свинок, которые к туберкулёзу чрезвычайно чувствительны.

Интереснейшей областью исследования, которая открылась посредством ПЦР-диагностики, стало изучение M. tuberculosis — латентной инфекции. Современная концепция туберкулёзной инфекции говорит о том, что из ста человек, которые находились в контакте с M. tuberculosis, девяносто вполне могут инфицироваться, но только у десяти из них активная болезнь получает развитие. Остальные имеют противотуберкулёзный иммунитет, и потому в девяноста процентах случаев инфекция останется латентной. Обнаружить такую закономерность помог именно молекулярно-генетический метод.

Генетики утверждают, что пятьдесят пять процентов лиц, у которых посевы патологического материала были отрицательными, и восемьдесят процентов лиц, заражённых M. tuberculosis, но с протекающей без каких-либо рентгенографических проявлений болезнью, ответы ПЦР получили положительные. Именно генетический метод диагностики помог выявить больных из групп риска с помощью ПЦР-исследований, причём результаты их анализов (микроскопия и посевы) были отрицательными, а субклиническая инфекция M. tuberculosis присутствовала.

Бактериологические лаборатории Российской Федерации используют и ускоренный метод абсолютных концентраций: тестируется нитратредуктазная активность микобактерий посредством реактива Грисса. Противотуберкулёзные центры пользуются методом, который позволяет определить лекарственную устойчивость. Это посев в жидкие среды, где автоматизирована радиометрическая и флюоресцентная система учёта роста микобактерий. Такой анализ делается быстро — до двух недель.

В настоящее время и новые методы разрабатываются: лекарственная устойчивость микобактерий оценивается на уровне генотипа. Изучение молекулярных механизмов резистентности показывает наличие генов и у микобактерий. Гены эти связаны с устойчивостью к определённым препаратам. Например, гены kasA, inhA, katG устойчивы к изониазиду, ген rpoB — к рифампицину, гены 16Sp РНК и rpsL — к стрептомицину, emb1 — к этамбутолу, gyrA — к фторхинолону и так далее.

В современной диагностике значительно повысился молекулярно-генетический уровень метода изучения ДНК и позволил проводить широкомасштабные исследования мутаций во всём их спектре. Теперь мы знаем, что наиболее распространены мутации в 516, 526 и 531 кодонах гена rpoB, а также выявлены устойчивости к различным препаратам. Существует целый комплекс методов для типирования микобактерий с использованием не только методов традиционных — биохимических, биологических и культуральных, но широко применяются и современные молекулярно-генетические методы. Уже существуют адекватные и обеспечивающие верную диагностику методики обнаружения моногенных болезней. Они основываются на исследованиях ДНК в точном районе определённого гена. Это, как правило, процесс сложный, трудоёмкий и дорогостоящий, зато данные, которые предоставляют методы молекулярно-генетического анализа, значительно более точны и информативны, чем данные всех других анализов.

Давно известно, что ДНК не изменяется за всю жизнь организма, что она в любой ядерной клетке однакова, и это даёт возможность брать на анализ абсолютно любые клетки организма, на любых стадиях онтогенеза. Повреждённый ген можно обнаружить до появления первых симптомов, до развёрнутой клиники заболевания, а также у здоровых гетерозиготных людей, но имеющих в гене мутацию. Молекулярно-генетические методы диагностики наследственных болезней позволяют выявить её (прямым подходом ДНК-диагностики), а также проанализировать сегрегацию заболевания в семье с маркерными локусами ДНК (полиморфными участками), которые тесно сцеплены с повреждённым геном (то есть косвенным подходом ДНК-диагностики). Прямая или косвенная — любая ДНК-диагностика основывается на методах, идентифицирующих строго определённый участок ДНК человека.

Прямыми методами ДНК-диагностики пользуются в случаях, когда ген-виновник наследственного заболевания известен, а также известны и типы его мутаций. Например, целесообразны прямые методы при целом ряде заболеваний. Это хорея Гентингтона (расширение CTG-повторов), фенилкетонурия (R408W), муковисцидоз (delF508, мажорная мутация) и тому подобные. Главным преимуществом прямого метода является стопроцентная точность диагностики, а также нет необходимости делать ДНК-анализ остальной семьи. Если мутация в соответствующем гене обнаружена, это позволяет совершенно точно утвердить диагноз наследственности, определить генотип для всей остальной отягощённой семьи.

Другим достоинством прямой диагностики считается выявление гетерозиготного носительства нехороших мутаций у родственников и родителей умершего от болезни. Это особенно актуально для заболеваний аутосомно-рецессивных. Недостатки у прямых методов тоже имеются. Чтобы их применить, нужно точно знать локализацию патологического гена, экзон-интронную его структуру и спектр его мутаций. Далеко не все моногенные болезни сегодня получили подобную информацию. Информативность прямых методов не может считаться полной, поскольку один и тот же ген может иметь большое количество патологических мутаций, что и обусловливает развитие наследственных болезней.

Косвенные методы в ДНК-диагностике применяются совсем в других случаях: если повреждённый ген не идентифицирован, а всего лишь локализован на хромосоме, или если прямая диагностика не дала результата (это бывает, если у гена сложная молекулярная организация или значительная протяжённость, если в нём много патологических мутаций). Косвенными методами проводится анализ сегрегации полиморфных маркеров в семье аллелей. Маркеры находятся в этом же хромосомном районе или тесно сцеплены с локусом заболевания и представляют собой делеции или инсерции, точковые замены, повторы, а их полиморфизм обусловлен разным количеством в блоке элементов.

Самыми удобными для косвенной диагностики считаются микросателлитные и минисателлитные полиморфные маркеры, которые широко распространены в геноме человека. Ценность их выражается в высокой информативности, если генетическое расстояние между повреждением в гене и маркером не оказывается слишком большим. В последнем случае точность оценки определяется в большой степени частотой рекомбинации между полиморфным маркером и повреждением. Косвенные методы диагностики также предусматривают обязательный предварительный этап исследования частоты аллелей анализируемых популяций среди носителей мутаций и больных, плюс к этому необходимость определения вероятности неравновесия и рекомбинации сцепления маркеров и мутантных аллелей гена.

Короткие сегменты РНК или ДНК, а также отдельный ген при микроскопическом исследовании визуализирован быть не может, поэтому, чтобы идентифицировать мутации, необходимы методы молекулярно-генетической диагностики. Существующий «Проект генома человека», как и другие достижения молекулярной генетики, во многом расширил возможность диагностики наследственных заболеваний — как пре-, так и постнатальной. Эти методы могут обеспечить раннее обнаружение и сделать прогноз поли- и моногенных болезней, у которых дебют происходит во взрослом возрасте. К сожалению, по техническим возможностям молекулярно-генетические исследования иногда выходят за этические рамки, которые установлены относительно наследственности, особенно когда диагностика проводится в подростковом и детском возрасте.

Структурные и количественные аномалии хромосом являются самыми распространёнными причинами и онкологических заболеваний, и многих пороков развития. Хромосомные аберрации необходимо идентифицировать, что важно для семейного консультирования — дать оценку прогноза наряду с репродуктивным риском при будущих беременностях. Хромосомный анализ является «золотым стандартом» генетической диагностики, но и у него возможности ограничены. Только методы молекулярно-генетического анализа могут сделать большее, потому что там применяются основанные технологиями клонирования флюоресцирующие метки, способны с их высокой чувствительностью выявить тонкие хромосомные изменения, которые невозможно обнаружить классическим цитогенетическим исследованием. Эти техники всё более расширяют наши диагностические возможности, когда обследуются дети с пороками развития, с умственной отсталостью, со многими другими наследственными заболеваниями.

Очень важными для человечества явились знания структуры и функций генов, видов их изменчивости, умение распознавать наследственные болезни, что произошло в связи с развитием молекулярной генетики. Методы её направлены на исследование молекулы ДНК — и когда она находится в норме, и при повреждении её. Получение последовательностей нуклеотидов дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) проходит поэтапно от получения образцов до идентификации отдельных фрагментов. Выделение геномной ДНК из клеток, рестрикция (разрывание), амплификация (клонирование), электрофорез фрагментов (разделение их по электрическому заряду и молекулярной массе с помощью агарозного геля). Идентификация определённых фрагментов, расположенных на его поверхности дискретной полосой.

Потом в дело вступают специальные фильтры, с помощью которых проходит гибридизация каждого фрагмента с клонированными фрагментами ДНК или с синтетическими радиоактивными зондами, являющимися контрольными, по которым и будет равняться каждый исследуемый фрагмент. Если изменилось положение или его длина сравнительно с зондом, если появился новый фрагмент или исчез, — всё это говорит о том, что исследуемый ген подвергся перестройке в последовательности нуклеотидов. Существует восемь основных методов молекулярно-генетического исследования: секвенирование (определение последовательности ДНК), полимеразная цепная реакция (увеличение числа последовательностей), получение праймеров известных генов, клонирование ДНК, получение рекомбинантных молекул, получение белков за счёт рекомбинантных молекул, создание полного набора (коллекции, библиотеки) клонированных фрагментов, которые получились с помощью рестрикции.

источник



Источник: art-mylife.ru


Добавить комментарий