Анализ крови методом ифа результат

Анализ крови методом ифа результат

Иммуноферментный анализ крови (ИФА) проводится для комплексной оценки защитных функций организма. В ходе проведения исследования определяется количество и свойства иммунных клеток, присутствие необходимых антител. ИФА анализ крови проводится для диагностики инфекционных, гематологических, аутоиммунных заболеваний, первичных и вторичных иммунодефицитов. Рассмотрим, что собой представляет анализ крови методом ИФА, и какие показания существуют для проведения данного исследования.

Анализ крови методом ИФА является лабораторным методом, с помощью которого в пробе крови определяют антитела или антигены. Данное исследование используется для выявления уровня иммуноглобулинов, иммунологических комплексов, гормонов.

Для назначения ИФА анализа крови существуют следующие показания:

  • диагностика инфекций, которые передаются половым путем – уреаплазма, микоплазма, хламидиоз, трихомонада, сифилис;
  • диагностирование вирусных заболеваний – цитомегаловирус, герпес, гепатиты, Эпштейн-Барр вирус;
  • определение уровня гормонов;
  • диагностика онкологических заболеваний;
  • определение иммунодефицита;
  • диагностирование аллергий;
  • предоперационное комплексное обследование перед пересадкой органов;
  • оценка эффективности терапии.

Принцип действия метода иммуноферментного анализа основан на определении в крови специфических белков-антител – иммуноглобулинов. Иммуноглобулины вырабатываются иммунной системой человека при проникновении в организм антигенов (чужеродных микроорганизмов). Такие иммунные молекулы связываются с множеством инфекционных возбудителей в организме и нейтрализуют их.

Иммуноглобулины обладают важной характеристикой – специфичностью. Благодаря этому они могут связываться с определенным антигеном, образуя комплекс антиген-антитело. Во время проведения ИФА анализа крови именно этот комплекс определяют качественно и количественно.

Различают иммуноглобулины пяти классов. Но обычно определяют три класса – иммуноглобулины A, M, G. Данные антитела накапливаются в организме в разное время от момента инфицирования.

  • Иммуноглобулины класса М (IgM) появляются в крови самыми первыми на пятые сутки от момента заражения. Они находятся в организме на протяжении 5–6 недель, затем исчезают из кровотока. Антитела IgM указывают на острый период заболевания или обострение болезни при ее хроническом течении.
  • Примерно через 3–4 недели со времени заражения в крови появляются иммуноглобулины класса G (IgG). Они могут существовать в крови человека несколько месяцев или даже лет. Согласно расшифровке ИФА анализа крови, если в двух пробах крови, взятых последовательно через две недели, увеличено количество иммуноглобулинов IgG, говорят о текущей инфекции или реинфекции – повторном заражении той же инфекцией.
  • Иммуноглобулины класса А (IgA) можно выявить данным методом исследования через 2–4 недели после заражения или обострения инфекционной болезни. Из них только 20% циркулирует в крови, остальные находятся в секрете слизистых оболочек. Антитела IgA исчезают из кровотока через 2–8 недель после уничтожения инфекционных агентов. Исчезновение данных иммуноглобулинов означает излечение от инфекции. Если после окончания болезни определено присутствие в крови антител IgA, значит, заболевание перешло в хроническую стадию.

Для проведения анализа крови методом ИФА чаще всего используют кровь человека. Но исследовать также можно содержимое стекловидного тела, спинномозговую жидкость, околоплодные воды.

Проба крови для исследования берется у пациента из локтевой вены. Сдавать кровь рекомендуется натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти не меньше 12 часов). Необходимо сообщить врачу, если пациент принимает лекарственные препараты, так как некоторые из них могут изменить результат анализа. На достоверность результатов исследования влияет прием алкоголя и наркотиков.

В бланке результата данного анализа указывается положительный (+) или отрицательный (-) результат определения каждого класса иммуноглобулинов.

Рассмотрим интерпретацию возможной расшифровки ИФА анализа крови.

  • Отрицательный результат IgM, IgG, IgA – отсутствие иммунитета к инфекции.
  • Отрицательный результат IgM, IgA и положительный результат IgG – постинфекционный или поствакцинальный иммунитет.
  • Отрицательный или положительный результат IgG, IgA и положительный результат IgM – острая инфекция.
  • Положительный результат IgM, IgG, IgA – обострение хронического инфекционного заболевания.
  • Отрицательный результат IgM и отрицательный или положительный результат IgG, IgA – хроническая инфекция.
  • Отрицательный результат IgM и не определяются IgG, IgA – выздоровление.

Анализ крови методом ИФА имеет много достоинств. Можно выделить основные из них:

  • относительно высокая точность (чувствительность);
  • возможность проведения ранней диагностики;
  • возможность отслеживания динамики инфекционного процесса;
  • высокий уровень унификации, что позволяет проводить массовые обследования;
  • небольшой промежуток времени, необходимый для получения результата анализа;
  • удобство в работе;
  • автоматизация всех этапов анализа;
  • относительно небольшая стоимость.

Недостатком метода ИФА является то, что иногда он дает ложноотрицательные или ложноположительные результаты. Кроме технических ошибок при проведении исследования, причиной ложных результатов может быть ревматоидный фактор у пациента, наличие у него хронических болезней (при которых вырабатываются антитела), нарушения обмена веществ, прием некоторых лекарственных препаратов.

С помощью данного метода исследования крови определяют наличие в организме следующих паразитарных процессов:

  • аскаридоз;
  • трихинеллез – анализ проводят несколько раз, максимальный уровень антител определяется на 4–12 неделе после заражения;
  • цистицеркоз;
  • тениоз;
  • фасциолез – антитела определяются в острой стадии заболевания;
  • описторхоз – проводят дифференциальную диагностику между хронической и острой формой болезни;
  • лямблиоз;
  • висцеральный и кожный лейшманиоз;
  • амебиаз;
  • токсоплазмоз.

ИФА анализ крови на паразитов используется для выявления антигенов (паразитов и продуктов их жизнедеятельности) и антител (иммуноглобулинов). Иммуноглобулины вырабатываются в организме как антитела к антигенам. Специфичность данного метода при определении паразитов составляет 90%. С помощью этого анализа можно определить вид паразитов, их количество, и благодаря уровню антител проследить динамику развития процессов.

источник

Для комплексной оценки состояния организма (в частности его защитных функций) назначается иммуноферментный анализ крови (ИФА). ИФА анализ крови выполняется для диагностики инфекционных, аутоиммунных, гематологических патологий, первичных и вторичных иммунодефицитов. В данной статье предлагаем рассмотреть более подробно, что являет собой анализ крови методом ИФА, а также какие существуют показания для его проведения.

Как мы уже отметили, анализ крови методом ИФА — это лабораторное исследование, посредством которого определяются антигены или антитела в пробе крови. Данный анализ применяется для выявления уровня гормонов, иммунологических комплексов и иммуноглобулинов. Существуют следующие показания для сдачи ИФА анализа:

  • Диагностирование аллергий.
  • Диагностирование болезней вирусного происхождения – Эпштейн-Барр вирус, герпес, гепатиты, цитомегаловирус.
  • Диагностика инфекций, передающихся половым путем – микоплазма, уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидиоз.
  • Определение иммунодефицита.
  • Диагностика онкологических патологий.
  • Оценка эффективности терапии.
  • Определение уровня гормонов.
  • Предоперационное комплексное обследование.

Принцип действия иммуноферментного анализа крови основан на исследовании крови на наличие иммуноглобулинов (специфических белков-антител). Иммуноглобулины вырабатываются иммунитетом при попадании в организм человека антигенов (чужеродных микроорганизмов). Эти иммунные молекулы связываются с различными инфекционными возбудителями и нейтрализуют их. Важной отличительной чертой, которой обладают иммуноглобулины, является их специфичность. Благодаря таким характеристикам они могут образовывать комплекс антиген-антитело, связываясь с определенным антигеном. Во время выполнения анализа крови ИФА именно этот комплекс определяют количественно и качественно.

Для проведения данного исследования зачастую используют кровь человека. Однако в качестве материала для анализа можно брать содержимое стекловидного тела, околоплодные воды, спинномозговую жидкость. Проба крови, как правило, берется из локтевой вены пациента. Кровь рекомендуется сдавать натощак (должно пройти не менее 12 часов со времени последнего приема пищи). Если пациент принимает лекарственные средства необходимо сообщить врачу, поскольку некоторые из них могут повлиять на результат анализа. Также на достоверность результатов анализов влияет прием наркотиков и алкоголя.

В бланке данного анализа обычно указывается отрицательный (-) или положительный (+) результат вычисления каждого класса иммуноглобулинов.

Предлагаем рассмотреть интерпретацию вероятной расшифровки анализа крови на ИФА.

  • IgG, IgA не определяются и результат IgM отрицательный – полное выздоровление.
  • Результат IgM, IgA, IgG отрицательный – иммунитет к инфекции отсутствует.
  • Результат IgG, IgA положительный и отрицательный, а также результат IgM положительный – наличие острой инфекции.
  • Положительный результат IgG и отрицательный результат IgA и IgM –поствакцинальный или постинфекционный иммунитет.
  • Положительный или отрицательный результат IgG, IgA и отрицательный результат IgM – хроническая инфекция.
  • Результат IgG, IgM, IgA положительный – обострение хронической инфекционной патологии.

В иммуноферментном анализе крови кроме уточнения классов антител в расшифровке указываются количественные их показатели. Однако обширное их объяснение предоставляет только лечащий доктор.

Сдать анализ ИФА врачи рекомендуют своим пациентам во многих случаях, поскольку это исследование имеет массу достоинств. Выделим основные из них:

  • Относительно небольшая стоимость.
  • Удобство в работе.
  • Возможность проведения диагностики на ранней стадии предполагаемого заболевания.
  • Относительно высокая точность полученных данных.
  • Небольшой промежуток времени, требуемый для получения результата исследования.
  • Возможность отслеживания динамики развития инфекционного процесса в организме.
  • Высокий уровень унификации, благодаря чему возможно проведение массовых обследований.
  • Автоматизация всех этапов исследования.

Недостатком ИФА анализа крови является то, что он может в достаточно редких случаях давать ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Также при проведении исследования помимо технических ошибок, причиной ложных результатов у пациента может послужить ревматоидный фактор, наличие у него хронических заболеваний (при которых вырабатываются антитела), прием некоторых лекарственных медицинских препаратов, нарушения обмена веществ.

Достаточно часто врачи назначают больным ИФА анализ крови на паразитов. Посредством данного способа исследования крови устанавливается присутствие в организме человека следующих паразитарных процессов:

  • Лямблиоз.
  • Аскаридоз.
  • Цистицеркоз.
  • Амебиаз.
  • Трихинеллез – исследование проводят не один раз, на 4–12 неделе после инфицирования определяется максимальный уровень антител.
  • Тениоз.
  • Описторхоз – выполняют дифференциальную диагностику между острой и хронической формой болезни.
  • Токсоплазмоз.
  • Фасциолез – в острой стадии болезни определяется наличие антител.
  • Кожный или висцеральный лейшманиоз.

Итак, можно подытожить: сдать анализ ИФА на паразитов необходимо для выявления антигенов (продуктов жизнедеятельности паразитов и само их наличие), а также антител (иммуноглобулинов). Специфичность данного метода исследования при определении паразитов согласно статистическим данным составляет около 90%. Благодаря этому анализу врач может в точности установить вид паразитов, их общее количество, а также проследить динамику развития патологических процессов благодаря уровню антител.

источник

Высокоточные методы анализа — неотъемлемая часть современной медицины и, в частности, диагностики. Доступные в наше время методы диагностики дают возможность своевременно выявить не только сам факт наличия, но и количество паразитов в организме пациента.

Сейчас, как правило, пациентам предлагается пройти всего один тест — иммуноферментный анализ.

Иммуноферментный анализ — узкоспециализированный вид анализа, который проводится в условиях лаборатории. Анализ основан на реакции организма, обычно называемой «антиген-антитело».

Метод анализа, основанный на данном показателе, даёт точность в 99%. Это самый точный из известных сейчас методов. В практике почти не было случаев, когда такой анализ выдавал ложные результаты.

Этот метод позволяет выявить:

  • значительное количество инфекционных болезней, вызываемых паразитами;
  • наличие разных видов онкомаркеров;
  • в репродуктивной медицине — наличие белков, гормонов и пептидов, необходимых для оценки фертильности пациента;

Достоверность результатов теста зависит от нескольких факторов:

  • конкретная разновидность паразита;
  • количество паразитов в организме;
  • скорость их размножения.

Иммуноферментный анализ широко используется в диагностике самых разных заболеваний. Главная его ценность в том, что он позволяет с высокой точностью выявлять болезни, протекающие бессимптомно.

Как известно, такие болезни нередко бывает проблематично обнаружить на ранней стадии и, соответственно, вовремя начать лечить.

Какие заболевания диагностируют при помощи иммуноферментного анализа:

  • онкологические заболевания;
  • инфекции, передающиеся половым путём (ВИЧ, хламидиоз, сифилис, уреаплазмоз, герпес и другие заболевания);
  • туберкулёз, корь, токсоплазмоз, гепатиты и так далее;
  • гормоны щитовидной железы;
  • половые гормоны;
  • различные аутоиммунные расстройства;
  • аллергические реакции и непереносимость отдельных продуктов питания.

Данная процедура помогает выявить:

  • заражение организма бактериями и вирусами;
  • белковую основу;
  • глистные инвазии;
  • инородные тела.

Собственно, процедура ИФА складывается из двух частей:

  1. иммунный ответ;
  2. ферментативная реакция.

Суть принципа «антиген-антитело» заключается в том, что возбудитель заболевания или инородное тело, то есть антиген, поступает в организм постепенно вместе с источником заражения. Этот процесс вызывает так называемый иммунный ответ, предназначенный для защиты организма от инородных элементов.

Проявления такой защиты зависят от самого антигена и от симптомов вызванной им болезни. Данная схема и получила название «антиген-антитело».

Для большей достоверности диагностики вся процедура иммуноферментного анализа проводится только в лабораториях и медицинских центрах. С пробой крови взаимодействуют различные антигены и антитела.

С целью выявления как вида, так и количества паразитов в организме пациента применяется иммуноглобулин классов «А» и «Е», который реагирует на паразитарные инвазии.

Такой анализ должен выявить:

Иммунная реакция показывает биологические связи в молекулах клеток микробов, на наличие которых и проводится анализ. Иммунная реакция как таковая — это только один из компонентов комплексной программы ИФА, второй же компонент — это ферментная реакция.

Узнавание антигена происходит в процессе контакта клетки иммунной системы (иммуноцита) с чужеродной клеткой. Индивидуальные особенности антигенов служат для иммунной системы средством распознавания «свой-чужой».

Фактически, антитело:

  • Это просто молекула, расположенная на поверхности иммуноцита.
  • Эта молекула и используется для распознания чужеродных клеток.

Передача полученной информации об антигене происходит на клеточном уровне. Связь разрушается, если клетка иммунная, если же нет — организм запускает естественную защитную реакцию.

Современной науке известны 5 классов антител, иначе называемых иммуноглобулинами или белковыми структурами.

Для обозначения антител используются латинские буквы: A, D, E, G и M.

В результатах анализов эти обозначения выглядят так:

В первую очередь необходимо подготовить специальные планшеты из полистирола, которые содержат 96 лунок. Перед анализом стенки каждой ячейки обрабатывают адсорбирующим антигеном.

В обработанные ячейки капают сыворотку крови. Гомологичные антитела и антигены реагируют друг с другом, образуя прочные связи. Не прикрепившиеся тельца вымываются. Затем в лунки добавляются антитела иммуноглобулинов вместе с помеченными особым образом ферментными элементами.

Реагенты помечаются для облегчения идентификации антител в анализируемой сыворотке. Хромогенный элемент, который ускоряет реакцию и подкрашивает лунки, добавляется после промывания. Интенсивность окраски по сравнению с изучаемым ферментом показывает примерное процентное содержание антигена в пробе крови.

Затем лаборант использует оптическую жидкость, чтобы:

  • замерить концентрацию антител в лунках;
  • сравнить полученный результат с контрольной пробой, то есть эталоном;
  • подсчитать концентрацию антител при помощи специальной шкалы.

Для анализа на глистные инвазии используется особый вариант системы тестирования, со своим набором показателей нормы и отклонений от неё.

Забор сыворотки крови для иммуноферментного анализа проводится только в условиях лаборатории. Берут кровь из вены, удаляют оттуда элементы, способные повлиять на процесс анализа и точность его результатов. Сдают анализ утром на голодный желудок.

Качество и количество антител говорит о присутствии чужеродных элементов в организме пациента, в том числе болезнетворных микроорганизмов. Эти же признаки указывают на то, что в организме начался воспалительный процесс.

Пример расшифровки результатов ИФА:

Стадия заболевания IgA IgM IgG
Первичная (2 недели с момента инфицирования) +
Первичная (2,5-3 недели с момента инфицирования) + +
Первичная (3-4 недели с момента инфицирования) + + +
Обострение хронической фазы (2 недели с начала обострения) + +
Хроническая +/- +
Прошедшая (инфекция излечена) +
Выздоровление Титр снизился в 2-4 раза после успешного лечения Титр снизился в 4-8 раза спустя 1-1,5 месяца после успешного лечения
Результат отрицательный

Сам по себе количественный анализ, проведённый данным методом, ещё не даёт возможность точно диагностировать болезнь, назначить курс лечения и определить дозировку препаратов.

У всех методик тестирования, даже самых передовых и высокоточных, к сожалению, кроме преимуществ, есть и свои недостатки.

Преимущества иммуноферментного анализа:

  • Специализация метода диагностики;
  • Повышенная чувствительность этого метода;
  • Применение новейших технологий.

Чувствительность метода диагностики — это высокая вероятность обнаружить искомое, даже если его концентрация в исследуемом материале крайне мала.

Специфичность методики означает:

    высокую степень достоверности, то есть отсутствие риска получить ложный результат. Если результат положительный, то пациенту гарантировано, что обнаружен именно тот вид паразитов, от которого он страдает;
  • влияние на результат «человеческого фактора», то есть возможных ошибок лаборанта, сведено к нулю, что также способствует повышению точности.
  • Возможные недостатки данного метода анализа:

    1. Он предполагает определение природы болезни, то есть интуитивно «угадать» правильный диагноз в данном случае невозможно;
    2. Высокая стоимость анализа.

    В процедуре ИФА напрямую используется способность антител находить антиген, образуя связи с метками. Данный способ анализа считают промышленным, время ожидания результата составляет не более часа.

    Особая метка-субстрат проявляется после ферментации. Уровень антител соответствует доле антигенов в исследуемом биоматериале.

    Существует также дуоденальный (иначе — непрямой) метод исследования на паразитарные инвазии, который широко применяется, несмотря на высокую точность ИФА.

    Дуоденальный (непрямой) иммуноферментный анализ проводится в 2 этапа:

    1. Сначала сопоставляют помеченные антитела с искомыми антигенами;
    2. Применяют помеченные антитела к непомеченным, обнаруженным на предыдущей стадии.

    Таким образом достигается двойной контроль антигенов и антител, увеличивающий достоверность анализа.

    При непрямом ИФА в лаборатории антиген фиксируют на поверхности лунки, он образует связи с немеченной частью антител.

    Достоинства дуоденального метода:

    • Двойной контроль изучаемого биоматериала, что значительно повышает точность;
    • Повышенная точность и специфичность самого метода анализа.

    Однако, данный способ занимает много времени и предполагает некоторое количество дополнительных действий. Тем не менее, точность исследования настолько высока, что она оправдывает этот недостаток. По этой причине большинство врачей рекомендуют именно дуоденальный метод анализа.

    При наличии всего необходимого инструментария и расходных материалов можно будет получить результат уже через 2 дня после сдачи. Если в лаборатории есть услуга экспресс-анализа, то обработать пробу могут всего за 3-5 часов.

    Где можно сдать ИФА:

    • в государственной поликлинике;
    • в частных клиниках.

    Расценки на иммуноферментный анализ напрямую зависят от уровня цен в конкретной клинике, в среднем его цена составляет не менее 4000 рублей.

    Сведения, полученные в результате этого исследования, могут стать полезным вкладом в медицинскую науку, однако, пациенту следует помнить, что, поскольку стоимость иммуноферментного анализа так высока, разумнее будет доверить эту процедуру надёжной проверенной временем клинике.

    К сожалению, государственные медицинские учреждения не всегда бывают оборудованы по последнему слову науки. Необходимых приспособлений для качественного забора биоматериала и его обработки в районной поликлинике может и не быть.

    Итак, чем полезен для пациента иммуноферментный анализ крови:

    • позволяет обнаружить глистную инвазию ещё на ранней стадии;
    • как следствие этого, позволяет своевременно начать лечение;
    • устойчивость методов даёт возможность проводить анализ с равной точностью у детей и у взрослых.

    Иммуноферментный анализ демонстрирует не только качественный, но и количественный фактор, то есть не только указывает на сам факт наличия гельминтов в организме пациента, но и даёт возможность оценить их число.

    источник

    ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты

    Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

    Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

    ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

    Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

    ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

    Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

    Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

    Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.

    Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

    Кол-во в организме Функции Период полураспада (дней) Значение
    G 70% Формируют пассивный иммунитет у новорожденного;

    необходимы для иммунного ответа

    улучшают фагоцитоз,

    21-24 обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях
    М 5-10% нужны для активации фагоцитоза,

    способны связать 5 молекул антигена,

    5 Обеспечивает первичную иммунную реакцию
    А 10-15 Нейтрализуют токсины и вирусы

    нужны для формирования раннего иммунитета

    Образование местного иммунитета

    4-5 Защита слизистых оболочек
    Е 0,2% вызывают аллергию и анафилаксию активируют тканевые базофилы 2 Защита от паразитов
    D 0,2% задействованы в выработке лимфоцитов, необходим как мембранный рецептор для антигенов; 3 Их роль малоизучена

    Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.

    ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.

    Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:

    • вирусный гепатит;
    • ВИЧ-инфекция;
    • цитомегаловирус,
    • вирус Эпштейна-Барр,
    • вирус герпеса,
    • корь
    • краснуха,
    • туберкулез,
    • сальмонеллёз,
    • дизентерия,
    • клещевой энцефалит,
    • бактерии хеликобактер,
    • боррелиоз,
    • столбняк,
    • сифилис,
    • дифтерия,
    • лептоспироз,
    • хламидиоза,
    • уреаплазмоз,
    • микоплазмоз,
    • коклюш.

    Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:

    • плоскими червями
    • аскаридами
    • гистолическими амебами,
    • печеночными тремадами,
    • лямблиями,
    • токсоплазмами,
    • трихинеллами,
    • двуусткой,
    • цестодозами.

    ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.

    При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:

    • за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
    • не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
    • стараться не допускать стрессов,

    Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.

  • прекратить употребление лекарственных средств не позже чем за 10 дней до манипуляции.
  • Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.

    Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.

    В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.

    Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.

    Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.

    Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.

    Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.

    После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

    Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

    • Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
    • Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
    • Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

    В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

    Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

    При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

    Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

    После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.

    При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

    Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

    Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

    Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.

    Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.

    На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.

    Возможны различные интерпретации результатов:

    1. IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
    2. IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
    3. IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
    4. IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
    5. IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
    6. IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.

    Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:

    • вирусный гепатит;
    • цитомегаловирус;
    • герпес;
    • ветряная оспа;
    • хламидиозом;
    • стафилококковая или стрептококковая инфекция.

    Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:

    Название гормона Пол Норма
    1 тиреоглобулин м/ж До 70 МЕ/мл
    2 тироксин м/ж 64-146 нмоль/л
    3 трийодтиронин м/ж 1,8-2,8 нмоль/л
    4 Свободный тироксин м/ж 11-25 пмоль/л
    5 Свободный трийодритонин м/ж 4,49-9,3 пмоль/л
    6 Тестостерон, дегидротестостерон Ж 0,5-10 мЕд/л

    ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.

    ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.

    Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:

    • иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
    • IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
    • IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.

    В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.

    Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).

    В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).

    При получении положительных проб далее следует:

    • если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
    • повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
    • при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.

    Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.

    ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.

    ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.

    Цитомегаловирус IgM обнаруживаются через 30-45 дней после заражения, либо во время реактивации инфекции в течение 4-6 месяцев

    источник

    Опубликовал: Parazitolog в Диагностика Февраль 16, 2019

    Метод диагностики (ИФА) является информативным и не слишком затратным, поэтому многие лаборатории предлагают своим клиентам данный метод (иммуноферментного анализа крови). Исследование проводится натощак, кровь для анализа берут из локтевой вены пациента. Перед ИФА желательно не курить и не употреблять алкоголь.

    Среди методов анализа крови, позволяющих оценить способность организма противостоять инфекционным болезням и показывающих фазу болезни, важное место занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Проведение этого исследования позволяет всесторонне оценить деятельность защитной функции крови и выявить состояние иммунодефицита при инфекционных патологиях, также заболеваниях крови, аутоиммунных процессах, гормональных проблемах.

    Это лабораторное исследование, которое позволяет определять наличие специфических антител (защитных факторов крови белковой природы) к определенным антигенам (болезнетворным агентам). Среди антител первостепенное значение имеют иммуноглобулины, которые могут существовать в виде иммунокомплексов.

    Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейрогуморальных реакций иммунитета человека, возникающих как ответная реакция на внедрение чужеродных антигенов. На каждый вид болезнетворного агента вырабатываются свои специфические антитела. Действуют они путем «связывания» антигена или патологического микроорганизма, образую комплексное соединение «антиген-антитело» с последующей нейтрализацией, ферментативным лизисом, реакциями фагоцитоза и выводом из организма.Именно по наличию определенных комплексов методом ИФА определяется вид возбудителя или имеющегося у больного вредного вещества.

    Стоит помнить, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в нашем организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула наше тело, т.е. остается, так называемый, «серологический шрам». Приведем пример: в ночном небе тысячи звезд. Многие из этих звезд уже давно погибли, но до нас до сих пор, веками, идет их свет. По сути, мы видим только след звезды. Свет есть, а звезды уже давно нет.

    Но если света нет, это не говорит о том, что звезды там не было. То же самое и с антителами. Их наличие не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента. Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет. Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими и дорогостоящими методами — ПЦР, бактериологические посевы. Возможен ложноположительный результат в случае, если несколько микробов обладают схожей антигенной структурой, тогда к разным микробам будут вырабатываться «похожие» антитела.

    Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

    Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови.

    Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

    Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным вторичное развитие патологии.

    Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

    Иммуноглобулин Е (IgE) используется в практике паразитологии.Иммуноглобулин D (IgD) располагается на B-лимфоцитах, находится в небольшой концентрации у здоровых людей. После 10 года жизни достигает максимальных значений. Количество иммуноглобулина D увеличивается при беременности, у больных системными заболеваниями соединительной ткани, бронхиальной астмой, заболеваниями, вызванные иммунодефицитным состоянием.

    Для иммуноферментного анализа в большинстве случаев используется кровь пациентов, иногда производят забор ткани стекловидного тела, жидкости спинномозгового канала, околоплодных вод.

    В случае отрицательных значений иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA можно говорить об отсутствии заболевания или его начальной фазе, также результат с минусами возможен при полном выздоровлении по прошествии значительного количества времени.

    Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки.

    Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки

    В случае высокого титра IgM при отрицательных значениях IgG, IgA можно делать вывод о наличии остро протекающего инфекционного заболевания.

    Одновременные положительные значения результатов иммуноглобулинов – IgA, IgM, IgG характерны для острой фазы рецидива имеющегося хронического заболевания.

    Для хронической инфекции, находящейся в фазе стихания процесса (ремиссии) ИФА показывает отрицательные значения иммуноглобулина M (IgM), при этом результат иммуноглобулинов G (IgG) и A (IgA) будет положительным.

    ИФА – это аббревиатура от «иммуноферментный анализ на паразитов». Она подразумевает под собой медицинское тестирование иммунной системы человека. В основу теста положена способность антител к изменению их цвета. Данный способ диагностики имеет множество положительных черт. Например, он способен обнаружить огромное множество болезней, причинами которых послужило заражение инфекцией. Наибольшую эффективность он проявляет в случаях заболеваний, вызванных паразитическими организмами.

    Что дает представленная технология: определение наличия гельминтов в крови; поиск других болезнетворных микроорганизмов в теле; можно узнать причины ухудшения вашего здоровья; лечение строится также на анализах, полученных таким способом; вы можете следить за состоянием своей иммунной системы.

    Еще одна хорошая черта – возможность отслеживать онкологические маркеры вне зависимости от их происхождения, но при условии их присутствия в организме, разумеется. Данный тест пригоден и для описания состояния репродуктивной системы человека. Наличие определенных белков, гормонов и пептидов, позволяют судить о потенциале партнера в плане зачатия ребенка, а также предположительном качестве будущего плода.

    Анализ крови на лямблии – довольно популярная практика у современных медиков. К тому же, данный метод исследования является прекрасным инструментом для биомедицинской аналитики и количественной статистики в плане специфичных антигенов.

    Будет большой ошибкой перепутать способ анализа ИФА с методом зондирования и последующего изучения кала. Последние проводятся при помощи методов на микроскопическом уровне, когда берется сданный пациентом образец кала, либо же он отбирается у потенциального больного непосредственно в медицинском учреждении. В образце пытаются обнаружить глистные инвазии и другие компоненты, так или иначе связанные с жизнедеятельность паразитов. Изучаются не только микроскопические паразитирующие организмы, но и их остатки, их яйца и личинки.

    Правда, это более сложные случаи, поэтому качество подобного анализа будет сильно зависеть от работников лаборатории, выполняющей тестирование. Особенности технологии и отличие ее от старых лабораторных исследований:

    • теперь вместо пробы кала используется кровь, для определения наличия гельминтов;
    • изучение пробы проводится в лаборатории очень быстро, уже на следующий день можно получить полную информацию;
    • стоимость лабораторного исследования недорогое, так как теология очень проста;
    • анализ крови на гельминтов дает высокие показатели точности.

    Актуальность и правдоподобность результатов теста прямопропорциональны квалификации медицинского персонала, технической оснащенности лаборатории, а также отсутствия какой-либо халатности или невнимательности у медиков. Однако, даже самый внимательный и ответственный лаборант испытает огромные трудности, если паразит присутствует в организме в его минимальной популяции, либо же выполнил кладку непосредственно в момент проведения тестирования.

    О том, какие бывают анализы крови с точки зрения иммунологической системы человека, мало кто знает, так эти анализы не так распространены. Как правило, такое исследование крови дает информацию о вирусе иммунодефицита в организме человека и является анонимной, так как проводится по желанию пациента.

    В основном, для проведения ИФА анализа, исследуемым биологическим материалом является кровь, однако, исследованию может подвергаться спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и др.

    Для забора используют взятую натощак из вены кровь, из которой для исследования методом центрифугирования получают сыворотку. Кроме этого, изучение сыворотки крови способно выявить ряд венерических заболеваний (сифилис, герпес, хламидиоз), а также все виды гепатита, корь, краснуху, паротит и токсоплазмоз.

    В основном, для проведения ИФА анализа, исследуемым биологическим материалом является кровь, однако, исследованию может подвергаться спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и др.

    Иммуноглобулины — это иммунные молекулы, способные связываться и нейтрализовать большинство инфекционных возбудителей и токсинов в организме. При этом важнейшей характеристикой иммуноглобулинов является их специфичность, то есть способность связываться с определенным антигеном. Именно это свойство используется для проведения анализа крови на иммуноглобулин.

    Существует пять типов иммуноглобулинов, однако наиболее изученными являются иммуноглобулины А, М, и G. Иммуноглобулины М и G проявляют свою активность в крови. Иммуноглобулины А являются, своего рода, барьером на поверхности слизистых оболочек, так как присутствуют там в большом количестве.

    Иммунологический анализ крови позволяет определять тип иммуноглобулинов, благодаря этому ИФА позволяет не только диагностировать заболевание, но и определить стадию данного и отслеживать динамику заболевания:

    • в первые 2 недели заболевания обнаруживаются только иммуноглобулины А;
    • со 2-й по 3-ю неделю заболевания в крови обнаруживаются иммуноглобулины А и М.;
    • Сс3 по 4 неделю анализ крови на иммуноглобулин определяются все три типа;
    • при выздоровлении в крови пропадают иммуноглобулины М, а количество А и G снижается в 2 – 4 раза;
    • при наличии хронического процесса в крови обязательно присутствуют иммуноглобулины G, иммуноглобулины М отсутствуют, иммуноглобулины А могут как присутствовать, так и отсутствовать.

    • Диагностика вирусных заболеваний: гепатиты, герпес, Эпштейн-Барр вирус, цитомегаловирус и др;
    • инфекции передающиеся половым путем: хламидиоз, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
    • сифилис; эндокринология (определение уровня гормонов);
    • онкомаркеры (диагностика онкологических заболеваний); иммунология (диагностика иммунодефицита);
    • аллергология (диагностика и лечение аллергий).

    Серологический анализ крови — лабораторный метод исследования крови, который применяется с целью диагностики инфекционных заболеваний и определения стадии инфекционного процесса. Серологическая реакция основана на взаимодействии антител и антигенов.

    Определение антигенов используют для определения родовой и видовой принадлежности микроорганизмов. Данный метод исследования применяется в урологии и венерологии. Кровь для серологического анализа крови берется утром натощак из вены.

    Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

    Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА.

    Вот наиболее распространенные цели анализа:

    • диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ; Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции; Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр; Ig M и IgG к герпетическим инфекциям; Ig M и IgG к токсоплазмозу;
    • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям; IgG к паразитарным заболеваниям; Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

    Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

    ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке.

    Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

    Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

    К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

    В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека. ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

    В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный).

    Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

    При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

    Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

    источник

    4



    Источник: art-mylife.ru


    Добавить комментарий